biosb BSB-3771-3說(shuō)明書(shū)
TintoFast Ki-67 Antibody Immunohistochemistry on a Frozen Acetone-fixed Squamous Cell Carcinoma Tissue
| 可能的使用 | 用于莫氏體外診斷 | |||||||||||||||||||||||||||
| 總結(jié)與說(shuō)明 | Ki-67 蛋白是增殖的細(xì)胞標(biāo)志物。它與細(xì)胞增殖密切相關(guān)。在間期，Ki-67 抗原只能在細(xì)胞核內(nèi)檢測(cè)到，而在有絲分裂中，大部分蛋白質(zhì)被重新定位到染色體表面。Ki-67 蛋白存在于細(xì)胞周期的所有活動(dòng)階段（G1、S、G2 和有絲分裂），但在靜息細(xì)胞 (G0) 中不存在。 TintoFast Ki-67 抗體是確定給定細(xì)胞群生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)的標(biāo)記。Ki-67 陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的比例（Ki-67 標(biāo)記指數(shù)）通常與癌癥的臨床病程相關(guān)。在這方面研究得好的例子是前列腺癌和乳腺癌。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 抗體類型 | 兔單克隆 | 克隆 | RM360 | |||||||||||||||||||||||||
| 同型 | IgG | 反應(yīng)性 | 石蠟，冷凍 | |||||||||||||||||||||||||
| 本土化 | 核 | 控制 | 睪丸，扁桃體，骨髓，胎盤，結(jié)腸，。扁桃體、輸卵管、星形細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌 | |||||||||||||||||||||||||
| 介紹 | TintoFast Ki-67 是一種兔單克隆抗體，來(lái)源于細(xì)胞培養(yǎng)上清液，經(jīng)過(guò)濃縮、透析、過(guò)濾滅菌和稀釋在 pH 7.5 的緩沖液中，含有 BSA 和疊氮化納作為防腐劑。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 可用性 |
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莫氏冷凍組織的標(biāo)本制備
將標(biāo)本嵌入 OCT 中的低溫恒溫器內(nèi)。
在 4-5 µm 處切割切片并安裝在帶正電的載玻片上，例如 Bio SB Hydrophilic Plus 載玻片 (BSB 7028) 或 TintoDetector 蓋間隙載玻片 (BSB 7006) 的下三分之一處。
在室溫下風(fēng)干載玻片 2 分鐘，然后在培養(yǎng)箱或干浴中在 60°C 下孵育載玻片 3 分鐘。
在室溫下用丙酮固定 2 分鐘，然后讓載玻片風(fēng)干。
莫氏冷凍組織的預(yù)處理
將 TintoDetector 培養(yǎng)箱預(yù)熱至 110 °C。
將 TintoDetector Cap Gap 載玻片 (BSB 7006) 面對(duì)面放置，然后將它們插入 TintoDetector 載玻片支架 (BSB 7003)。
將載玻片浸入含 EDTA 的 ImmunoDNA Retriever 中，通過(guò)毛細(xì)作用提取足夠的溶液以覆蓋組織。
在預(yù)熱的 TintoDetector 培養(yǎng)箱中加熱載玻片 3 分鐘。
將載玻片轉(zhuǎn)移至室溫并冷卻 1 分鐘。
莫氏 IHC 檢測(cè)
HIER 后，將載玻片轉(zhuǎn)移到 ImmunoDNA 清洗機(jī)，靜置 1-2 分鐘。
對(duì)于手動(dòng)染色，在環(huán)境溫度下進(jìn)行抗體孵育。對(duì)于自動(dòng)染色方法，請(qǐng)根據(jù)儀器制造商的說(shuō)明進(jìn)行抗體孵育。
用 ImmunoDNA 洗滌器或去離子水清洗載玻片。
繼續(xù) IHC 檢測(cè)協(xié)議。用 ImmunoDNA 洗滌液在每個(gè)步驟之間清洗載玻片。
HRP Green 免疫組化方案的縮寫(xiě) Mohs PolyDetector Plus DAB HRP Brown
與一抗孵育 5 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
用 M/R 鏈接孵育 4 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
HRP 標(biāo)簽 4 分鐘。
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
準(zhǔn)備
DAB Brown（在 1ml DAB 緩沖液中加入 1 滴 DAB Chromogen；充分混合）
或 HRP Green（在 1 ml HRP Green Buffer 中加入 1 滴 HRP Green Chromogen；充分混合）
用 DAB 或 HRP Green 孵育 1-2 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
用蘇木精或核固紅復(fù)染 30 秒
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
使用 AquaMounter 安裝或使用 Fast ChromoProtector 使組織脫水，然后使用 PermaMounter 安裝
| 步 | Mohs PolyDetector HRP Green 或 DAB 20 分鐘協(xié)議 |
| 希爾 | 3 分鐘。 |
| 一抗 | 5分鐘。 |
| 第一步檢測(cè) | 4分鐘。 |
| 第二步檢測(cè) | 4分鐘。 |
| 底物色原 | 1-2 分鐘。 |
| 復(fù)染/蓋玻片 | 變化 |
此協(xié)議也可用于使用檸檬酸鹽或 EDTA 檢索的 FFPE 組織。
