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abvector #H15說明書

 更新時(shí)間:2020-09-22 點(diǎn)擊量:1178

abvector #H15說明書

 

FoldHelper™-104和FoldHelper™-104P

 

 

 

 

#H15和#H16

 
                  
圖1. Hsp104在用FoldHelper™-104感染的昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)。 感染后60小時(shí)收獲
Spodoptera frigiperda Sf9細(xì)胞,在50 mM Tris-HCl pH 8.0、150
mM EDTA,0.5%NP-40中溶解,并通過在30,000g下離心15分鐘去除不溶級分??扇苄缘鞍自?1%SDS-PAGE中分離,并用考馬斯亮蘭染色。NC陰性對照桿狀病毒,不表達(dá)任何外源蛋白質(zhì)或多面體蛋白(目錄號C13)。
       推薦用途: 
       與任何產(chǎn)生細(xì)胞質(zhì)
       蛋白聚集體的重組桿狀病毒共感染。
 
 FoldHelper™-104提供酵母Hsp104(Acc#AAA50477)的表達(dá)。Hsp104屬于分子伴侶的Hsp100 / Clp組,其可用作逆轉(zhuǎn)而不是防止蛋白質(zhì)聚集的工具(Glover JR和Tkach,JM,Biochem.Cell Biol。,79:557-568,2001)。Hsp104具有重塑活性,可作用于捕獲的聚集蛋白。Hsp104需要與特別是屬于Hsp40和Hsp70家族的常規(guī)伴侶進(jìn)行特定的相互作用,以促進(jìn)其產(chǎn)生的中間體的重折疊(Glover JR和Lindquist S.,Cell,94:73-82,1998)。酵母Hsp104可以在異源系統(tǒng)中起作用,例如,它可以減少哺乳動(dòng)物細(xì)胞中外源蛋白的聚集(Bao YP等,J.Biol.Chem。,277:12263-12269,2002)。

FoldHelper™-104P提供與FoldHelper™-104相同水平的Hsp104表達(dá)。另外,它提供了蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)(Acc#CAA28775)的高水平表達(dá)。已證明PDI在體外氧化蛋白折疊中是有效的(Weissman,JS和Kim PS,Nature,365:185-188,1993)。PDI具有多種功能,盡管在ER中豐富,但也存在于細(xì)胞質(zhì)中(Turano,C。等,J.Cell.Physiol。,193:154-163,2002)。

盡管PDI在感染了重組桿狀病毒的昆蟲細(xì)胞中具有無法解釋的作用,但令人歡迎的是PDI可以提高此類細(xì)胞的壽命。這種細(xì)胞病變效應(yīng)在表達(dá)高水平PDI的受感染細(xì)胞中明顯不明顯,并且這種細(xì)胞比未提供PDI表達(dá)的對照病毒感染的細(xì)胞存活約24小時(shí)。類似地,哺乳動(dòng)物細(xì)胞中PDI的過表達(dá)導(dǎo)致重組蛋白生產(chǎn)的壽命延長和時(shí)間延長(Kitchin,K和Flickinger,MC,Biotechnol.Progr。,11:565-574,1995)。

如果您尚未使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(也稱為桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)或BEVS)工作,可以在TECHNOLOGY上進(jìn)行快速更新。轉(zhuǎn)到BACULOVIRUS教程有關(guān)桿狀病毒轉(zhuǎn)染,重組桿狀病毒繁殖和重組桿狀病毒蛋白表達(dá)研究的簡單在線說明。
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