qa-bio E-S001說(shuō)明書(shū)
外糖苷酶
-從聚糖上切割特定的末端單糖-
允許對(duì)聚糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行詳細(xì)分析
-測(cè)試所有酶是否沒(méi)有蛋白水解或意外的糖苷活性
來(lái)自脲曲霉的重組
部件號(hào)-酶量
E-S001-60 µLs¹
E-S001-20-20 µLs¹
E-S001-200-200 µls²¹
含緩沖液
² 僅含酶
神經(jīng)氨酸酶，NANase，N-乙酰神經(jīng)氨酸糖水解酶，Exo-α-唾液酸酶
α（2-3,6,8,9）唾液酸酶Au切割所有復(fù)雜的碳水化合物和糖蛋白上的非還原性末端唾液酸殘基。不同鍵的相對(duì)裂解率是：
α（2-6）>α（2-3）>α（2-8），α（2-9）。
另外，該酶將裂解分支的唾液酸（連接至內(nèi)部殘基）。該特性使其在唾液酸酶中具有*性。裂解分支殘基可能需要高濃度的酶和延長(zhǎng)的孵育時(shí)間。要僅切割非還原性末端α（2-3）未分支的唾液酸殘基，請(qǐng)使用Sialidase SP（部件號(hào)E-S007）。
α-（2-3,6,8,9）唾液酸酶是從脲節(jié)桿菌的克隆中分離出來(lái)的。使用寡糖標(biāo)準(zhǔn)品已對(duì)該酶進(jìn)行了廣泛表征。
源重組細(xì)菌從脲桿菌中的大腸桿菌。
EC 3.2.1.18
20 mM Tris-HCl，25 mM NaCl，pH 7.5中的唾液酸酶含量
包括20 µL和60 µL的包裝尺寸：
5x反應(yīng)緩沖液250 mM磷酸鈉，pH 6.0
比活度 > 135 U / mg
活度 > 5 U / ml
分子量 70,000道爾頓
pH范圍 4.5-7，宜6.0
推薦的緩沖液濃縮物為標(biāo)準(zhǔn)底物的酶活性提供了宜pH。如果由于糖蛋白溶解度或活性要求而在次宜pH值下進(jìn)行糖苷酶處理，則預(yù)期酶活性會(huì)有所降低。
建議用法
1.向試管中加入多100μg糖蛋白或1 nmol寡糖。
2.加水至14μL。3
.添加4μL5X反應(yīng)緩沖液。
4.加入2μLα（2-3、6、8、9）唾液酸酶。
5.在37°C下孵育1小時(shí)。
如果天然和脫唾液酸化蛋白之間的大小差異足以檢測(cè)，則可以通過(guò)SDS-PAGE監(jiān)測(cè)脫唾液酸化作用。
注意：如果存在分支唾液酸，則需要更長(zhǎng)的孵育時(shí)間。
特異性消除所有非還原性末端支鏈和直鏈唾液酸
比活性定義為在37℃，pH 5.0下從MU-NANA [2'-（4-甲基傘形酮）-α-DN-乙酰基神經(jīng)氨酸]生產(chǎn)1 µmol甲基傘形酮所需的酶量。
儲(chǔ)存將酶儲(chǔ)存在4℃。
純度如下測(cè)試每批α（2-3,6,8,9）唾液酸酶是否污染了蛋白酶。將10μg變性的BSA與2μL酶孵育24小時(shí)。經(jīng)處理的BSA的SDS-PAGE分析未顯示降解跡象。
生產(chǎn)宿主菌株已經(jīng)過(guò)廣泛測(cè)試，不會(huì)產(chǎn)生任何可檢測(cè)的糖苷酶。
穩(wěn)定性正確存放后至少可穩(wěn)定12個(gè)月。幾天暴露于環(huán)境溫度不會(huì)降低活性。酶在37°C下保持活躍至少一周。
